Реакция геллера на инсулин

Темы для реферативных сообщений. 1. мелатонин, место синтеза, химическая природа, влияние на метаболизм в норме и патологии

Реакция геллера на инсулин

1. Мелатонин, место синтеза, химическая природа, влияние на метаболизм в норме и патологии. Возможность использования мелатонина в клинической практике.

Нарушения функции соматотропного гормона. Молекулярные причины. Клинические проявления заболеваний, их диагностика. Основы лечения.

Несахарный диабет, его виды. Молекулярные механизмы. Метаболические нарушения. Клинические симптомы. Основы лечения.

Причины недостаточности функции щитовидной железы. Симптомы, клинические проявления у детей и взрослых. Основы лечения. Роль гипофункции щитовидной железы в репродуктивном здоровье женщины.

Лабораторная работа 1

Качественные реакции на инсулин

Принцип

Инсулин является простым белком и дает характерные качественные реакции на белок: биуретовую, ксантопротеиновую, Фоля и др. Эти реакции не специфичны.

Материал исследования

Раствор инсулина.

Реактивы

1) Реактив Фоля, содержащий 5% раствор (CH3COO)2Pb и 30% раствор NaOH, 2) 0,5% р-р нингидрина, 3) 30% р-р NaOH, 4) 10% р-р NaOH, 5) 5% р-р Pb(CH3COO)2, 6) 5% р-р нитропруссида натрия, 7) конц. HNO3, 8) 5% р-р CuSO4.

Проведение анализа

В пробирки наливают по 5 капель раствора инсулина и проделывают качественные реакции на белок.

Реакция на пептидную связь

Для обнаружения пептидной связи в инсулине используется универсальная биуретовая реакция.

Принцип

Пептидная группа образует в щелочной среде с ионами Сu2+ комплексное соединение фиолетового цвета с красным или синим оттенком в зависимости от числа пептидных связей. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству пептидных групп.

Проведение анализа

В пробирку с 5 каплями раствора инсулина вносят 3 капли 10% раствора NаОН и 1 каплю 5% раствора CuSО4.

Реакция для обнаружения a‑аминогрупп

Для обнаружения a‑аминогрупп, содержащихся в аминокислотах, и концевых a‑аминогрупп инсулина используется нингидриновая реакция.

Принцип

При нагревании белка с нингидрином происходят окислительное отщепление a‑аминогрупп и восстановление нингидрина. Восстановленный нингидрин реагирует с аммиаком и другой молекулой окисленного нингидрина с образованием комплекса сине-фиолетового цвета.

Проведение анализа

5 капель раствора инсулина смешивают с 5 каплями 0,5% раствора нингидрина. Пробирки нагревают и кипятят до появления сине-фиолетового окрашивания.

Реакция на ароматические аминокислоты

Для обнаружения ароматических аминокислот (фенилаланин, тирозин, триптофан) используется ксантопротеиновая реакция.

Принцип

Ароматическое кольцо при взаимодействии с концентрированной азотной кислотой образует динитросоединение желтого цвета.

Проведение анализа

К 5 каплям 1% раствора инсулина добавляют 2 капли конц.HNO3 и осторожно нагревают. Наблюдают за появлением желтого окрашивания, при отсутствии желтого цвета еще добавляют 1-2 капли конц.HNO3. При добавлении избытка 30% раствора NаОН окраска переходит в оранжевую.

Реакции на серосодержащие аминокислоты

Принцип

Сульфгидрильные группы в инсулине подвергаются щелочному гидролизу, в результате чего происходит отщепление серы в виде сульфида натрия Na2S, который вступает в дальнейшие реакции:

o реакция Фоля – Na2S с ацетатом свинца Pb(CH3COO)2 дает черный или бурый осадок сульфида свинца;

o реакция с нитропруссидом – Na2S дает с нитропруссидом натрия соединение, окрашенное в красно-коричневый цвет.

Проведение анализа

5 капель раствора инсулина и 5 капель 30% раствора NaOH кипятить 1‑2 минуты. Разделить содержимое на 2 части для реакций “а” и “б”.

а) Реакция Фоля

К 5 каплям гидролизата добавляют 1 каплю раствора уксусно-кислого свинца и нагревают до кипения. Отмечают появление бурого или черного осадка.

б) Реакция с нитропруссидом

К 5 каплям гидролизата добавляют 2-3 капли раствора 5% натрия нитропруссида. Отмечают появление красно-коричневого окрашивания.

Оформление работы

Отмечают принцип методов, регистрируют результаты анализа и делают вывод о наличии инсулина в исследуемом материале.

Лабораторная работа 2

Качественная реакция на тироксин

Реактивы

1) 10% р-р NaOH, 2) 10% р-р Н2SO4, 3) 2% р-р KJ, 4) 10% р-р NaHCO3, 5) 1% р-р крахмала, 6) лакмусовая бумага, 7) 0,5% спиртовый р-р фенолфталеина.

Материал исследования

Таблетки тиреоидина.

Проведение анализа

1. Гидролиз тиреоидина (выполняет лаборант):

В ступку помещают 10 таблеток тиреоидина и тщательно растирают. Растертую массу пересыпают в колбу для гидролиза, добавляют 20 мл 10% раствора NaHCO3. Колбу с обратным холодильником помещают на асбестовую сетку и содержимое колбы кипятят точно 15 минут (с момента закипания) при умеренном нагревании.

2. Обнаружение йода в гидролизате тиреоидина:

Для обнаружения йода в гидролизате в пробирку наливают 24 капли гидролизата тиреоидина, прибавляют 3 капли 1% раствора крахмала, 1 каплю 0,5% спиртового раствора фенолфталеина, 4 капли 2% раствора KJ и 10-15 капель 10% раствора Н2SO4 до прекращения выделения пузырьков углекислого газа и появления синего окрашивания.

Оформление работы

Отмечают принцип методов, регистрируют результаты анализа и делают вывод о наличии тироксина в исследуемом материале.

Тема 10.3. Гормоны гипофиза, надпочечников

и половых желез

Актуальность

В организме кортикотропин и гормоны надпочечников выполняют функции, связанные с деятельностью организма в состоянии острого и хронического напряжения, обеспечивая устойчивость к повреждающим воздействиям среды. Гормоны половой сферы участвуют в поддержании полового поведения и процессах размножения.

В клинике глюкокортикоиды применяют как противовоспалительные и антиаллергические препараты. Половые гормоны и их аналоги используют в онкологической практике, в заместительной гормонотерапии, в гормональной контрацепции.

Цель

Изучение строения и биологических эффектов гормонов надпочечников и половых желез.

Вопросы для самоподготовки

1. Классы гормонов в соответствии с химическим строением, биологическими функциями и принадлежностью к эндокринным железам.

Химическая формула адреналина и норадреналина. Характеристика адреналина по плану:

o химическая природа,

o место и химизм реакций синтеза,

o регуляция синтеза и секреции гормона,

o органы-мишени,

o локализация рецепторов в клетке и механизмы действия,

o влияние на обмен углеводов, белков, липидов – реакции и ферменты, чувствительные к действию гормона,

o понятие феохромоцитомы, клинические проявления, основы лечения.

Типы адренорецепторов и особенности их действия. Биохими­ческие эффекты гормона при стрессовых ситуациях. В чем заключается механизм лечебного действия адреналина при остановке сердца, приступах астмы?

Характеристика следующих гормонов: кортиколиберин, кортикотропин (АКТГ), кортизол по плану:

o название,

o химическая природа и строение,

o место синтеза, транспорт в крови,

o регуляция синтеза и секреции гормона,

o органы-мишени,

o локализация рецепторов в клетке и механизм действия,

o влияние на обмен углеводов, белков, липидов, минеральных веществ – реакции и ферменты, чувствительные к действию гормона,

o гипо- или гиперфункция гормона, метаболические нарушения, клинические проявления.

Изменение метаболизма в жировой, мышечной, лимфоидной, эпителиальных тканях при гипо- и гиперкортицизме. Что значит выражение стероидный диабет?

Основные этапы синтеза стероидных гормонов. Роль прегненолона и прогестерона – ключевых соединений на пути синтеза. Специфические гидроксилазы, определяющие образование минералокортикоидов и глюкокортикоидов. Роль ароматаз в синтезе эстрогенов.

Характеристика минералокортикоидов (альдостерона) по плану:

o химическая природа и строение,

o место синтеза, транспорт в крови,

o регуляция синтеза и секреции гормона,

o органы-мишени,

o локализация рецепторов в клетке и механизм действия,

o влияние на обмен минеральных веществ и воды – реакции и ферменты, чувствительные к действию гормона,

o гипо- или гиперфункция гормона, метаболические нарушения, клинические проявления.

Роль ренин-ангиотензиновой системы в регуляции синтеза и секреции альдостерона. Биохимический механизм развития почечной гипертензии.

Окситоцин, лактотропный, фолликулостимулирующий и лютеинизирующий гормоны гипофиза, прогестерон и эстрадиол, тестостерон. Их характеристика по плану:

o название,

o химическая природа и химическая формула (для стероидных гормонов),

o место синтеза,

o регуляция синтеза и секреции гормона,

o органы-мишени, транспорт в крови,

o локализация рецепторов в клетке и механизм действия,

o влияние на обмен углеводов, белков, липидов, минеральных веществ – биохимические процессы, чувствительные к действию гормонов,

o гипо- или гиперфункция гормона, метаболические нарушения, клинические проявления.

Цикличность изменений концентрации гонадотропных гормонов, прогестерона и эстрогенов в организме женщины (менструальные циклы).

Качественные реакции на адреналин.

Составьте таблицу для гормонов коры надпочечников и половых гормонов по приведенной схеме:

Просмотров 1023 Эта страница нарушает авторские права

Источник: https://allrefrs.ru/2-12969.html

Опыт 1 Доказательство белковой природы инсулина

Реакция геллера на инсулин

Биуретовая реакция

К 8-10 каплям раствора инсулина прибавляют 6-8 капель 10 %-ного раствора NaOH и 1-2-капли 1 %-ного раствора CuSO4. Появляется сине-фиолетовое или красно-фиолетовое окрашивание, указывающее на наличие пептидных связей в молекулу инсулина.

Реакция Фоля

К 8 – 10 каплям раствора инсулина прибавляют 10 – 12 капель 30%-ного раствора NaOH и 1-2-капли 5%-ного раствора Рb(СН3СОО)2. При длительном нагревании появляется чёрный (или бурый) осадок.

Реакция Милана

К 8-10 каплям раствора инсулина прибавляют 3-4 капли реактива Милона и осторожно нагревают. Жидкость окрашивается в красный цвет и выпадает красно-коричневый осадок.

Реакция Геллера

К 10-12 каплям концентрированной НNО3 по стенке наклонённой про­бирки прибавляют (не допуская смешивания жидкостей) раствор инсулина. На границе двух слоев жидкости образуется осадок белка в виде кольца.

Опыт 2 Обнаружение йода в препарате щитовидной железы

К половине таблетки тиреоидина (препарата, представляющего собой обезжиренную и высушенную щитовидную железу животных) прибавляют 10-12 капель концентрированной HNO3. Для проведения гидролиза содер­жимое пробирки нагревают 1-2-мин (не допуская вспенивания).

После это­го в пробирку добавляют 8-10 капель 2%-ного раствора КIO3, который окисляет образовавшуюся при гидролизе йодистоводородную кислоту.

По­сле охлаждения содержимое пробирки разделяют на две части и открыва­ют молекулярный йод по реакции с крахмалом (при добавлении 1-2 капель 1%-ного раствора крахмала наблюдается синее окрашивание) или экстрак­цией йода хлороформом (при приливании 1 мл хлороформа, встряхивании и отстаивании хлороформный слой окрашивается в фиолетовый цвет).

Опыт 3 Качественные реакции на адреналин.

Окисление адреналина йодатом калия

К 3-4 каплям раствора адреналина (1:1000) прибавляют 5-6-капель 2%-ного раствора КIO3 и 10 – 12 капель 10%-ного раствора СН3СООН. Жидкость слегка нагревают. Появляется красно-фиолетовое окрашивание.

Реакция с дихроматом калия

Раствор адреналина (3-4 капли) смешивают с 1-2-каплями 2%-ного раствора К2Сr2О7. Жидкость окрашивается в коричневый цвет.

Проба с йодом

10-12 капель раствора адреналина (1:1000) смешивают с 1 каплей 0,1%-ного раствора I2 в KI. При нагревании появляется розовое или красное окрашивание.

Диазореакция на адреналин

К свежеприготовленному диазореактиву (3 капли 1%-ного рас­твора сульфаниловой кислоты в 2 %-ном растворе НС1 и 3 капли рас­твора NaNO2) прибавляют 5-6 капель раствора адреналина (1:1000) и 4-5-капель 10%-ного раствора Na2CO3. Жидкость окрашивается в красный цвет.

Обнаружение группировки пирокатехина в молекуле адреналина

К 8-10 каплям раствора адреналина (1:5000) прибавляют 1 каплю 1%-ного раствора FеСl3. Содержимое пробирки окрашивается в изумруд­но-зелёный цвет. От прибавления 1 капли концентрированного рас­твора NH4OH окраска переходит в вишнёво-красную (или коричне­вую).

Опыт 4 Качественные реакции на фолликулин

Диазореакция на фолликулин

К 8-10 каплям спиртового раствора эстрона прибавляют 5-6-капель 10%-ного раствора Na2CO3 и 6- 8-капель свежеприготовлен­ного диазореактива (см. предыдущую работу). Постепенно появляется бледно-жёлтое окрашивание (вследствие образования азокрасителя).

Реакция с концентрированной серной кислотой

Пробирку с 15 – 16 каплями спиртового раствора фолликулина помещают в кипящую водяную баню на 5 – 6-мин для удаления спир­та. К оставшемуся фолликулину прибавляют 20 – 25 капель концен­трированной H2SO4 и вновь нагревают на водяной бане до появления жёлтого, а затем оранжевого окрашивания (имеющего зелёную флуо­ресценцию).

Литература

1 Проскурина, И. К. Биохимия : учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / И. К. Проскурина. – М.: ВЛАДОС-ПРЕСС, 2003. – 240 с.

2 Биологическая химия: учебник / Т. Т. Березов [и др.]. – М.: Меди­цина, 1998.-704 с.

3 Основы биохимии : учебник в 3 т. /А. Уайт [и др.]. – М.: Мир, 1981. Т. 1-Мир, 1981.-534 с. Т. 2-Мир, 1981.-617 с. Т. 3-Мир, 1981.-726 с.

4 Белясова, Н. А. Биохимия и молекулярная биология : учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / Н. А. Белясова. – Мн.: Книжный Дом, 2004. – 416 с.

5 Шапиро, Д. К. Практикум по биологической химии : практикум / Д. К. Шапиро. – Мн.: Вышэйшая школа, 1972. – 256 с.

6 Комов, В. П. Биохимия : учеб. для вузов / В. П. Комов, В. Н. Шве­дова. – 3-е изд., стереотипное. – М.: Дрофа, 2008. – 640 с.

Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 373;

Источник: https://studopedia.net/4_57487_opit--dokazatelstvo-belkovoy-prirodi-insulina.html

Аллергические реакции на инсулин

Реакция геллера на инсулин
• Библиотека • Сахарный диабет • Аллергические реакции на инсулин

Аллергические реакции на инсулин (по данным разных авторов) встречались в 5-30% случаев.

В большинстве случаев они связаны с присутствием в препаратах инсулина белковых примесей со значительной антигенной активностью. Аллергические реакции могут возникать на применение любого инсулина.

Однако в связи с тем, что в настоящее время используются, как правило, высокоочшценные инсулины, можно ожидать уменьшения частоты этого осложнения.

Образование антител к инсулину контролируется генетически, что частично объясняет неодинаковую переносимость одного и того же инсулина разными больными. По наблюдениям А.В.Древаля (1974), антите-лообразование интенсивнее при тяжелом диабете и при микроангиопатии, а также при введении препаратов пролонгированного действия.

В настоящей главе рассматривается терапия аллергических реакций на менее очищенные препараты инсулина.

Различают аллергические реакции на инсулин местные (локальные) и общие (генерализованные).

Локальная аллергическая реакция на инсулин возникает в месте введения инсулина, чаще через 1-2 недели от начала лечения, обычно остро (в течение 1-го часа после инъекции, редко – спустя 6-24 ч).

Она выражается в гиперемии и отечности участка кожи диаметром 1 – 5 см, сопровождается жжением, зудом или болью. Иногда реакция проявляется папуллезной сыпью, инфильтратом в подкожной клетчатке в месте инъекции, очень редко бывает асептический некроз ткани по типу феномена Артюса.

В генезе аллергических реакций немедленного типа ведущую роль играют циркулирующие антитела классов IgE и IgG.

Общая аллергическая реакция на инсулин может иметь вид уртикарной зудящей сыпи, ангионевротического отека, бронхоспазма, желудочно-кишечных расстройств, полиартралгии, изменений в системе кроветворения (тромбоцитопеническая пурпура, эозинофилия, увеличение лимфатических узлов), редко – в виде анафилактического шока. Генерализованная аллергическая реакция в большинстве случаев возникает на фоне нарастающей местной реакции на инсулин. К счастью, аллергия становится генерализованной редко, примерно у 0,1% больных, лечащихся инсулином.

Проведенные исследования показали, что в патогенезе генерализованной реакции на инсулин основное значение имеют антитела класса IgE.

Установлено, что генерализованные системные реакции проявляются чаще у больных, которым вводятся малоочищенные препараты инсулина.

Предполагается, что антигеном становится не молекула инсулина, а другие белковые компоненты препарата инсулина. Однако имеются исследования, указывающие на то, что антигеном может выступать сам инсулин.

Аллергическую реакцию кожи на инсулин не всегда легко отличить от неаллергического воспаления, связанного с механической травмой. В таких случаях проводят аллергологическую диагностическую пробу.

Местные аллергические реакции могут спонтанно исчезнуть через 2- 3 недели. Если эти реакции упорно продолжаются, то лечение заключается в следующем:

  1. Вместе с пациентом, у которого развилась аллергическая реакция, необходимо проанализировать технику введения инсулина, поскольку, кроме наличия антигенных веществ в препаратах инсулина, могут быть нарушены правила проведения инъекции: низкая температура раствора инсулина, поверхностное введение препарата, внутрикожное попадание спирта при инъекции и др.
  2. Заменить один биологический вид инсулина на другой.
  3. Перейти на очищенные инсулины (монопиковые, монокомпонентные).
  4. При отсутствии положительного эффекта от смены препарата необходимо каждую инъекцию инсулина вводить с 1-2 мг гидрокортизона (гидрокортизон-гемисукцинат).

В практической работе врача важно решить вопрос: допустимо ли продолжение инсулинотерапии при местной и тем более при общей аллергической реакции на инсулин.

Считается, что если лечение инсулином показано больному, то при наличии только кожной реакции оно может быть продолжено, но под строгим врачебным контролем в стационаре. Приблизительно в трети таких случаев происходит спонтанная гипосенсибилизация к инсулину.

Так же поступают при общей аллергической реакции, за исключением тех случаев, когда инсулинотерапия должна быть продолжена по жизненным показаниям: диабетическая прекома или кома.

Терапия генерализованной аллергии к инсулину проводится следующим образом.

  1. Заменяют препарат инсулина на высокоочищенный (с меньшей иммуногенностью).
  2. При неэффективности замены инсулина проводится специфическая гипосенсибилизация (десенсибилизация) с применением монопикового или монокомпонентного инсулина. Ее можно проводить быстро или медленно. Быстро проводят тогда, когда инсулинотерапию нельзя отменить более чем на 2-3 суток. В этом случае используются различные схемы. По одной из них начинают с введения 1/1000 БД инсулина. С этой целью 4 БД инсулина разводят в 400 мл изотонического раствора хлорида натрия или апирогенной воды. 0,1 мл этого раствора (1/1000 ЕД инсулина) вводят внутрикожно в область предплечья. Через каждые 30 мин вводят раствор, содержащий 1/500, затем 1/250 и 1/125 ЕД инсулина. На 2-е сутки с теми же интервалами вводят раствор, содержащий 1/100, 1/50 и 1/12 ЕД инсулина. На 3-й сутки – 1/4, 1/2, 1 и 2 ЕД инсулина. На 4-е сутки дозу инсулина постепенно доводят до терапевтически эффективной. Быструю гипосенсибилизацию начинают с дозы 0,02-0,04 БД, увеличивая ее в 2 раза через каждые 2-3 ч. Если очередная доза вызывала местную аллергическую реакцию, то несколько раз повторяют введение предыдущей дозы. Можно применить и другую схему введения инсулина: под кожу в высоких разведениях 4-6 раз в сутки (или через 30 мин) с постепенным, в течение нескольких дней, повышением дозы до необходимой терапевтической (в 0,1 мл физиологического раствора хлорида натрия растворяют инсулин короткого действия в концентрации – 0,001, 0,002, 0,004, 0,01, 0,02, 0,04, 0,1, 0,5, 1 БД).
  3. Если жизненных показаний к инсулинотерапии нет, то гипосенсибилизацию проводят медленно. Дозу инсулина, начиная с 1/1000-1/10000 ЕД, доводят до терапевтической дозы в течение от 10 дней до 2-3 мес.
  4. При неэффективности десенсибилизации очищенный свиной инсулин и человеческий инсулин необходимо применять с глюкокортикоидами (особенно при экстренной инсулинотерапии). Инсулин вводится малыми дозами с 2 мг гидрокортизона в одном шприце внутримышечно или вместо гидрокортизона перорально дают 30-60 мг преднизолона в сутки в течение 2-3 недель с последующим снижением дозы. Во время десенсибилизации не рекомендуется вводить ан-тигистаминные препараты и глюкокортикоиды, если нет признаков анафилаксии. При сохранении резко выраженной чувствительности к инсулину десенсибилизацию прекращают.

Во всех случаях аллергии к инсулину необходима санация очагов инфекции.

Бoгдaнoвич B.Л.

Источник: https://www.rostmaster.ru/lib/endodiabet/treatmentdiabetes-0107.shtml

Работа № 1. Качественные реакции на инсулин

Реакция геллера на инсулин

Инсулин является типичным гормоном белковой природы, содержащий сульфгидрильные группы цистеина, и дает цветную биуретовую реакцию на белок и реакцию Фоля на содержание SH-групп. Для реакций используют готовый препарат инсулина в ампулах.

а) Биуретовая реакция на пептидную связь.

Ход работы:В пробирку добавить 5 капель раствора инсулина, 10 капель раствора 10% раствора едкого натра и 1 каплю 1% раствора сульфата меди. Отметить появление сине-фиолетового окрашивания.

б) Реакция Фоля на серу содержащие аминокислоты.

Ход работы: В пробирку налить 5 капель раствора инсулина, добавить 5 капель 30% раствора едкого натра и 1 каплю 5% раствора уксуснокислого свинца. Отметить появление черного осадка.

Работа № 2. Качественные реакции на адреналин.

а) Реакция с хлорным железом.

Ядро пирокатехина адреналина образует с ионами железа соединения типа фенолята.

Ход работы: В пробирку поместить 3 капли 0,1% раствора адреналина, прибавить 1 каплю 1% раствора хлорного железа (FеСl3). Отметить появление изумрудно-зеленого окрашивания. При добавлении 1 капли концентрированного раствора аммиака окраска переходит в красную, а затем в коричневую.

б) Диазореакция.

При добавлении к раствору адреналина диазореактива образуется сложное соединение типа азокрасителя красного цвета.

Ход работы: Поместить в пробирку 3 капли 1% раствора сульфаниловой кислоты, 3 капли 5% раствора азотистокислого натрия (Nа NО2), 5 капель 0,1% раствора адреналина и 3 капли 10% раствора углекислого натрия. Отметить появление красной окраски.

Работа № 3. Качественная реакция на тироксин.

При разрушении тироксина щелочью образуется йодистый калий, из которого йодноватистый калий легко вытесняет свободный йод. Выделившийся йод дает с крахмалом характерное синее окрашивание.

Ход работы: Для щелочного гидролиза тиреоидина 5 таблеток тиреоидина тщательно растереть в фарфоровой ступке. Порошок переместить в колбочку для гидролиза, добавить 5 мл. 10% раствора едкого калия (КОН) и 5 мл. дистиллированной воды. Содержимое колбы кипятить 12-15 минут.

Для открытия йода к 1мл. гидролизата добавить по каплям 10% раствора серной кислоты (Н2SО4) до кислой реакции по лакмусу, затем прибавить 3-4 капли 1% раствора крахмала и 5-10 капель 2% раствора йодноватистого калия (КIО3). Отметить появление синего окрашивания.

Работа № 4. Количественное определение адреналина (по Фолину).

Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении интенсивности синего окрашивания, которое образуется при взаимодействии адреналина с реактивом Фолина.

Реактив Фолина состоит из солей фосфорновольфрамовой и фосфорномолибденовой кислот, которые при взаимодействии с адреналином восстанавливаются с образованием более низких окислов металлов, комплексы которых окрашиваются в синий цвет.

Ход работы: В 2 центрифужные пробирки (опыт и контроль) внести по 1мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В опытную пробирку прилить 0,1мл сыворотки (плазмы) крови или 0,5мл слюны, в контрольную – такой же объем дистиллированной воды.

Пробирки встряхнуть и центрифугировать при 2000 об./мин. В течение 5-6 минут. Надосадочную жидкость осторожно слить в чистые пробирки, добавить по 4мл. 10% раствора углекистого натрия (Nа2СО3) и 0,5мл. рабочего раствора Фолина.

Разви-вается синяя окраска, интенсивность которого измерить в кювете на 10мм при красном светофильтре опыт против контроля.

Количество адреналина в пробе определить по калибровочному графику с содержанием в 10,15 и 20 мкг адреналина в 0,1мл воды и выражают на литр биологической жидкости.

У здорового человека в сыворотке (плазме) крови содержится 100-230 мкг/л, в слюне – 0-30 мкг/л адреналина. При эмоциональном или физическом напряжении, при феохромоцитоме (опухоль мозгового слоя надпочечников) содержание гормона многократно возрастает.

Эталоны ответов на тесты

Вид 1. Тест 1:А, Б, В, Е. Тест 2: Г.

Вид 2. Тест 1: 1-А, Г; 3-А, В, Г, Д; 4-Б; 5-Б.

Тест 2: 1-А; 2-В; 3-А; 4-А; 5-А.

Вид 3. Тест 1: 1→3→5→4→2→7→6.

Тест 2: 3→1→2→5→4→6.

Вид 4. Тест 1: В (+, +, -). Тест 2: Е (-, -, -).



Источник: https://infopedia.su/16x7dd0.html

Биуретовая реакция на инсулин

Реакция геллера на инсулин

Дата14.06.2016
өлшемі48.03 Kb.
— Общая цель занятия: привить знания о механизме действия гормонов, изменении гормонального статуса при ряде эндокринных заболеваний.— Частные цели: владеть методикой по качественному определению инсулина, адреналина.
Основные вопросы темы1. Понятие о гормонах, биологическая роль. Классификация.3. Гормоны гипофиза.4. Клетки, органы-мишени, клеточные рецепторы гормонов.5. Мембранный и внутриклеточный механизмы действия гормонов.6. Гормоны поджелудочной железы (инсулин, глюкагон), строение, механизм действия. Сахарный диабет, клинические проявленияКачественные реакции на инсулин (реакция Геллера, Фоля, биуретовая реакция).1. Материалы лекций.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. — М.: Медицина, 2004. С. 248-251, 288-2863. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к практическим занятиям по биохимии.- М.: Медицина, 1983, раб. 40.Лабораторно-практические работы.Качественные реакции на инсулин (реакция Геллера, Фоля, биуретовая реакция).1. Биуретовая реакцияК 5 каплям раствора инсулина прибавляют 5 капель 10% раствора NаОН, 2 капли 1% раствора CuSO4 и все перемешивают. В пробирке образуется розово-фиолетовое окрашивание.Вывод: объясните появление окрашивания. 2. Реакция ГеллераК 10 каплям концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке пробирки приливают равный объем (10 капель) раствора инсулина. Пробирку наклоняют под углом 45˚ так, чтобы жидкости на смешивались. На границе двух жидкостей образуется белый аморфный осадок в виде небольшого кольца.К 5 каплям раствора инсулина прибавляют 5 капель реактива Фоля. Пробирку прокипятить и дать постоять 1-2 минуты. При этом появляется черный или бурый осадок.Вывод: объясните образование осадкаГраф-логическая структура к занятию № 10.Тема: Гормоны.Учебные и воспитательные цели:— Общая цель: привить знания о влиянии на обмен веществ гормонов гипофиза, щитовидной железы, коры надпочечников, половых гормонов, о клинических проявлениях заболеваний, связанных с гипо-, гиперфункций данных гормонов.— Частные цели: уметь проделывать качественные реакции на адреналин и владеть методикой определения продуктов окисления адреналина.1. Гормоны мозгового вещества надпочечников: адреналин, норадреналин, химическое строение, механизм действия;2. Гормоны коры надпочечников (глюкокортикоиды, минералокортикоиды), строение и влияние на обменные процессы. Гипо- и гиперфункция, клинические проявления.3. Гормоны щитовидной железы, строение. Клинические проявления при гипотиреозе, гипертиреозе. Эндемический зоб. Причины возникновения патологии и способы предупреждения.4. Гормоны регулирующие уровень фосфора и кальция в крови.1.Качественная реакция на адреналин.2.Методика определения продуктов окисления адреналина.2. Ситуационные задачи. Литература:1. Материалы лекций.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. — М.: Медицина, 2004. С. 255-288.3. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к практическим занятиям по биохимии.- М.: Медицина, 1983, раб. 41, 42.1. Качественная реакция на адреналин.Принцип метода. При взаимодействии адреналина с диазореактивом, жидкость окрашивается в красный цвет вследствие образования сложного соединения типа азокрасителя.К 6 каплям 0,5% раствора сульфаниловой кислоты прибавляют 6 капель 0,5% раствора нитрата натрия, 10 капель раствора адреналина и 3 капли 10% раствора NаОН. Содержимое пробирки окрашивается в красный цвет.2. Методика определения продуктов окисления адреналина. Флюоресценция продуктов окисления адреналинаПринцип метода. Адреналин, окисляясь кислородом воздуха, при добавлении щелочи дает флюоресцирующие продукты.К 10 каплям воды приливают 6 капель 10% раствора NаОН и 6 капель раствора адреналина (из ампулы). Поместив пробирку перед флюороскопом, наблюдают зеленую флюоресценцию продуктов окисления адреналина.общей и биологическойКОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА № 3Цель: контроль приобретенных знаний Основные вопросы темы.1. Понятие о гормонах, биологическая роль. Классификация.2. Роль ЦНС в регуляции обменных процессов, рилизинг-факторы,3. Гормоны гипофиза.4. Клетки, органы-мишени, клеточные рецепторы гормонов.5. Мембранный и внутриклеточный механизмы действия гормонов.6.Гормоны поджелудочной железы (инсулин, глюкагон), строение, механизм действия. Сахарный диабет, клинические проявления.7.Гормоны мозгового вещества надпочечников: адреналин, норадреналин, химическое строение, механизм действия;8.Гормоны коры надпочечников (глюкокортикоиды, минералокортикоиды), строение и влияние на обменные процессы. Гипо- и гиперфункция, клинические проявления.9. Гормоны щитовидной железы, строение. Клинические проявления при гипотиреозе, гипертиреозе. Эндемический зоб. Причины возникновения патологии и способы предупреждения.10. Гормоны регулирующие уровень фосфора и кальция в в крови.Литература:
  1. Материалы лекций.
  2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. — М.: Медицина, 2004.

Источник: https://saharvnorme.ru/diabet/biuretovaja-reakcija-na-insulin.html

Гормон поджелудочной железы – инсулин

Реакция геллера на инсулин

Вводные замечания

Гормоны.

Гормоны (греч. hormao – возбуждаю) – биологически активные, специфичные органические вещества, синтезирующиеся в специализированных эндокринных (лат.

endo – внутрь, krinein – отделяю) железах или железах внутренней секреции, поступающие в кровь и оказывающие регулирующее влияние на обмен веществ и физиологические функции.

Гормоны пищеварительного тракта (секретин, панкреозимин, холецистокинин, энтерогастрон) в отличии от типичных гормонов (эндокринных желез) синтезируются слизистой оболочкой тонкого кишечника.

Кроме того, существуют гормоноиды (тканевые гормоны) – вещества, сходные с гормонами, но образующиеся в ряде тканей, органов, а не в специализированных железах.

К ним относятся серотонин, ацетилхолин, норадреналин, гаммя-гаминомасляная кислота, дофамин, гистамин,- рицины, ангиотензин, простагландины.

По действию между гормонами и гормоноидами нет резкой границы: и те, и другие обладают большой биологической активностью.

Специфические особенности биологического действия гормонов можно выразить тремя положениями: а) гормоны оказывают биологическое действие в ничтожно малых концентрациях (от 10-9 до 10-12г); б) действие гормонов в целостном организме определяется в известной степени контролирующим влиянием центральной нервной системы; в) железы внутренней секреции и продуцируемые ими гормоны составляют единую систему, тесно связанную при помощи механизмов прямой и обратной связи.

Химическая природа гормонов различна и условно их можно разделить на следующие группы: 1) пептидной и белковой природы: сложные белки-

гликопротеиды (фолликулостимулирующий, лютеинизирующий,

тиреотропный), простые белки (пролактин, гормон роста, инсулин и др.

), пептиды (АКТГ, меланотропин, глюкагон, кальцитонин,вазопрессин, окситоцин, липотропин, липокаин, гормоны гипоталамуса, гормоны пищеварительного тракта); 2) производные аминокислот: тирозина (тиреоидные гормоны, катехоламины), триптофана (мелатонин, адреногломерулотропин); 3) стероидной природы (кортикостероиды, половые гормоны, 1,2,5-дигидроксихолекальциферол – гормон почек); 4) производные полиненасыщенных карбоновых кислот – линолевой и арахидоновой (простагландины).

Синтезированные гормоны в специализированных железах не накапливаются, а поступают в кровь и соединяются с белками плазмы или форменными элементами крови, образуя малоактивные комплексы. С кровью гормоны направляются к клеткам органов-мишеней, где взаимодействуют со специфическими белками-рецепторами.

В зависимости от способа взаимодействия с рецепторам механизмы действия гормонов подразделяют на три группы: 1) мембранный; 2) мембранно-внутриклеточный; 3) внутриклеточный.

Разрушение гормонов происходит в печени.

Эндокринные заболевания возникают не только при гипер- и гипофункции щитовидных желез, но также при интенсивном распаде гормонов или при нарушении функции рецепторов, без которых гормон не проявляет своего действия.

Гормоны в настоящее время применяют для лечения эндокринных и неэндокринных заболеваний. Гормоны определяются двумя способами: биологическими (испытания на лабораторных животных) или химическими.

Время отводимое на выполнение работы – 2 часа.

Лабораторная работа №1.

«Качественные реакции на отдельные гормоны»

1.

1. Цель работы: Изучить химические методы обнаружения гормонов в
биологических жидкостях.

1.

2 Реактивы: водный раствор адреналина; 0,1н раствор йода; 3% р-р
хлористого железа (111); 10% р-р едкого натра; 1% р-р сернокислой меди; 0,5% р-р уксуснокислого свинца; концентрированная азотная кислота; 10% р-р бикарбоната натрия; 10% р-р серной кислоты; 1% р-р крахмала; йодноватый калий 2% р-р; таблетки тиреодина; дистиллированная вода; фолликулин, (эстрон) – спиртовый или масляный раствор; концентрированная серная кислота.

1.

3. Оборудование:штатив с пробирками, пипетки, спиртовки или электроплитки, ступка, колбы для гидролиза, воронки, водяная баня, лакмусовая бумага.

1 .4. Ход работы:

Гормон поджелудочной железы – инсулин

ОПЫТ. 1. – реакция Геллера: к 1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке пробирки прилить равный объем раствора инсулина. Пробирку наклонить под углом 45° так, чтобы жидкости не смешивались. На границе двух жидкостей образуется белый аморфный осадок в виде небольшого

ОПЫТ. 2. – биуретова реакция: к 1 мл инсулина добавить равный , объем 10%

р-р едкого натра и 1 – 2 капли р-ра CuSO4, жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.

ОПЫТ. 3. – реакция Фоля: к 1 мл. р-ра инсулина прилить 1 мл. уксуснокислого свинца, несколько капель 10% р-ра едкого натра (до исчезновения мути) и нагреть до потемнения раствора. Сделать вывод о химической природе инсулина.

Дата добавления: 2016-07-29; просмотров: 515 | Нарушение авторских прав | Изречения для студентов

Источник: https://lektsii.org/6-25085.html

Аллерген c73 – инсулин человеческий, IgE

Реакция геллера на инсулин

[21-261] Аллерген c73 – инсулин человеческий, IgE

600 руб.

Аллергия к человеческому инсулину наблюдается значительно чаще, чем к свиному и бычьему, хотя он менее антигенен.

Аллергия, как правило, проявляется не сильно выраженными местными кожными реакциями в виде покраснения в месте инъекции или образования небольшой папулы и системными реакциями в виде крапивницы.

Определение специфического иммуноглобулина Е к данному аллергену в повышенном количестве указывает на наличие сенсибилизации организма к нему.

Синонимы русские

Специфический иммуноглобулин класса Е к инсулину человеческому.

Синонимы английские

Insulin (Human), IgE, Human Insulin AB.

Метод исследования

Иммунохемилюминесцентный анализ.

Единицы измерения

МЕ/мл (международная единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Основной участник аллергической реакции немедленного типа (1-го типа) – иммуноглобулин класса Е (IgE). Для каждого аллергена существует специфический иммуноглобулин Е. Целью данного теста является определение аллергической реакции к инсулину человеческому.

Инсулин – это белковый гормон, который регулирует обмен углеводов в организме, он вырабатывается клетками поджелудочной железы.

При развитии такого заболевания, как сахарный диабет, все клетки, способные производить инсулин, погибают. Это приводит к дефициту гормона в организме и неконтролируемому повышению уровня сахара в крови.

Введение инсулина извне на сегодняшний день является единственным методом лечения данного заболевания.

Исторически первые препараты инсулина для заместительной терапии сахарного диабета получали из экстрактов поджелудочных желез крупного рогатого скота и свиней.

Но так как инсулины животного происхождения отличались от человеческого по составу аминокислот, а также при недостаточной очистке содержали примеси, способные вызывать, в том числе, и аллергические реакции, от их применения постепенно отказываются.

Развитие генно-инженерных технологий позволило искусственно синтезировать препарат, полностью соответствующий по составу аминокислот инсулину человека. В России в настоящее время преимущественно применяются препараты генно-инженерного человеческого инсулина.

Однако и применение генно-инженерного инсулина полностью не исключает аллергических реакций, хотя они и встречается намного реже, чем на инсулины животного происхождения (по некоторым данным, менее чем у 1 % начавших терапию рекомбинантным инсулином наблюдается развитие аллергических реакций).

Считается, что это связано с изменением пространственной конфигурации искусственной молекулы гормона. Чаще всего реакции гиперчувствительности проявляются зудом, покраснением кожи в месте инъекции.

Однако возможно развитие и системных аллергических реакций, например генерализованной крапивницы и отека Квинке.

Выполнение анализа безопасно для пациента по сравнению с кожными тестами (in vivo), так как исключает контакт с аллергеном. Кроме того, прием антигистаминных препаратов и возрастные особенности не влияют на качество и точность исследования.

Количественное определение специфических IgE-антител позволяет оценить взаимосвязь между уровнем антител и клиническими проявлениями аллергии.

Низкие значения этого показателя указывают на низкую вероятность аллергического заболевания, в то время как высокий уровень имеет высокую корреляцию с клиническими проявлениями заболевания.

При выявлении высоких уровней специфических IgE возможно предсказать развитие аллергии в будущем и более яркое проявление ее симптомов. Однако концентрация IgE в крови нестабильна.

Она меняется с развитием заболевания, с количеством получаемой дозы аллергенов, а также на фоне лечения. Рекомендуется повторить исследование при изменении симптомов и при контроле проводимого лечения. О необходимости повторного исследования нужно консультироваться с лечащим врачом.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики гиперсенсибилизации к препаратам рекомбинантного человеческого инсулина.

Когда назначается исследование?

  • При наличии симптомов аллергии, предположительно, связанных с терапией препаратом человеческого инсулина.

Что означают результаты?

Референсные значения: 0.00 – 0.10 МЕ/мл.

Причины повышенного результата:

  • сенсибилизация к инсулину человеческому.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие сенсибилизации к данному аллергену;
  • длительное ограничение или исключение контакта с аллергеном.

Важные замечания

  • Так как молекулы инсулинов разного происхождения имеют в некоторой мере схожую аминокислотную структуру, антитела к животным инсулинам могут перекрестно реагировать и с человеческим инсулином (перекрестная реактивность).
  • Выполнение данного исследования безопасно для пациента по сравнению с кожными тестами (in vivo), так как исключает контакт пациента с аллергеном. Прием антигистаминных препаратов и возрастные особенности не влияют на качество и точность исследования.

Также рекомендуется

+ определение специфических иммуноглобулинов класса E к прочим аллергенам

Кто назначает исследование?

Аллерголог, гастроэнтеролог, дерматолог, педиатр, терапевт, врач общей практики.

Литература

  • Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 1065-1069.
  • A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 9th Edition, by Frances Fischbach, Marshall B. Dunning III. Wolters Kluwer Health, 2015. Pages 620-621.
  • Аллергология и иммунология: национальное руководство / под ред. Р. М. Хаитова, Н. И. Ильиной. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 520-522, 524-536.
  • Эндокринология. Национальное руководство. Краткое издание / под ред. И. И. Дедова, Г. А. Мельниченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. С. 121, 132.

Источник: https://helix.ru/kb/item/21-261

WikiDiabet.Ru
Добавить комментарий